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為空間蛋白組學(xué)技術(shù)的發(fā)展提供強(qiáng)有力工具
空間蛋白組學(xué)被評(píng)為Nature Methods 2024年度方法。FluoXpert? 多重免疫熒光技術(shù)（multiplexed immunofluorescence, mIF）基于循環(huán)間接免疫熒光染色原理，搭配使用多重免疫熒光試劑套裝，可檢測(cè)多達(dá)24個(gè)蛋白標(biāo)記物，這為空間蛋白組學(xué)技術(shù)的發(fā)展提供了強(qiáng)有力的工具。mIF利用不同的宿主物種一抗特異性結(jié)合抗原，再通過(guò)偶聯(lián)熒光團(tuán)的宿主特異性二抗檢測(cè)每種抗體，通過(guò)抗體染色、信號(hào)移除和重新染色的迭代過(guò)程實(shí)現(xiàn)高達(dá)24蛋白檢測(cè)，最終呈現(xiàn)同一個(gè)樣本單細(xì)胞水平、亞細(xì)胞分辨率的空間蛋白圖譜。mIF的發(fā)展有助于深入理解蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)功能和相互作用，識(shí)別功能相關(guān)的單細(xì)胞狀態(tài)，促進(jìn)基礎(chǔ)和臨床轉(zhuǎn)化的研究。
通過(guò)染色-拍照-洗脫多輪循環(huán)，實(shí)現(xiàn)不同種類目標(biāo)蛋白多重免疫熒光測(cè)定?；诳乖贵w特異性結(jié)合染色，加上先進(jìn)的光路系統(tǒng)、圖像拼接算法，保證極高的空間分辨率圖像的同時(shí)，實(shí)現(xiàn)組織切片精準(zhǔn)定位，描繪出蛋白質(zhì)空間表達(dá)信息。溫和洗脫技術(shù)保證低組織損傷，并保證新一輪抗原-抗體結(jié)合，可實(shí)現(xiàn)20+抗體染拍循環(huán)。
兼容傳統(tǒng)切片的制備流程，以石蠟切片為例，組織染色前處理，包括石蠟組織的切片制備、脫蠟、水化，接著進(jìn)行載片裝配、試劑針從試劑盒吸取不同孔位試劑實(shí)現(xiàn)不同抗體染色、流體泵流過(guò)裝有組織切片的芯片載物臺(tái)實(shí)現(xiàn)換液洗脫，通過(guò)不同腳本實(shí)現(xiàn)多輪染色、拍照、洗脫自動(dòng)化循環(huán)流程。
在生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域中，許多研究問(wèn)題只能通過(guò)同時(shí)觀察單個(gè)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的表達(dá)豐度和分布來(lái)解決。FluoXpert? 多重免疫熒光技術(shù)（mIF）使得在單個(gè)細(xì)胞中識(shí)別20+蛋白成為可能，有助于認(rèn)識(shí)生物醫(yī)學(xué)中的組織微環(huán)境和細(xì)胞生態(tài)系統(tǒng)。目前mIF已廣泛應(yīng)用于研究目標(biāo)組織的細(xì)胞組成、功能表型、細(xì)胞間相互作用，在描繪信號(hào)通路研究、腫瘤免疫微環(huán)境、預(yù)后標(biāo)志物評(píng)價(jià)以及伴隨診斷開(kāi)發(fā)等方面具有較大的前景。
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